Ako dodávateľ sterilného lyofilizovaného prášku sa ma často pýtajú na bežné metódy analýzy tohto produktu. V tomto blogovom príspevku sa podelím o niektoré z najpoužívanejších analytických techník, ktoré zaisťujú kvalitu, bezpečnosť a účinnosť sterilného lyofilizovaného prášku.
1. Fyzikálna charakteristika
Vzhľad a morfológia
Vizuálna kontrola je prvým krokom pri analýze sterilného lyofilizovaného prášku. Prášok by mal mať jednotný vzhľad, bez viditeľných nečistôt, zhlukov alebo zmeny farby. Mikroskopické vyšetrenie môže poskytnúť podrobnejšie informácie o veľkosti častíc, tvare a povrchových charakteristikách prášku. Napríklad skenovacia elektrónová mikroskopia (SEM) môže odhaliť povrchovú topografiu častíc, čo môže ovplyvniť rekonštitučné vlastnosti a stabilitu prášku [1].
Analýza veľkosti častíc
Veľkosť častíc hrá kľúčovú úlohu pri účinnosti sterilného lyofilizovaného prášku. Na určenie distribúcie veľkosti častíc sa bežne používajú techniky, ako je laserová difrakcia, dynamický rozptyl svetla (DLS) a preosievanie. Laserová difrakcia je rýchla a presná metóda, ktorá dokáže merať širokú škálu veľkostí častíc. DLS je vhodný na meranie submikrometrových častíc a môže poskytnúť informácie o hydrodynamickom polomere častíc. Preosievanie je jednoduchá a nákladovo efektívna metóda na oddeľovanie častíc na základe ich veľkosti, ale môže mať obmedzenia pri meraní veľmi jemných častíc [2].
Hustota a objemové vlastnosti
Hustota a objemové vlastnosti sterilného lyofilizovaného prášku, ako je hustota po strasení, objemová hustota a stlačiteľnosť, môžu ovplyvniť jeho tekutosť, balenie a rekonštitúciu. Tieto vlastnosti je možné merať pomocou štandardných metód. Napríklad hustota po strasení sa určuje mechanickým poklepávaním odmerného valca obsahujúceho prášok, kým sa nedosiahne konštantný objem. Pomer hustoty po strasení k objemovej hmotnosti, známy ako Carrov index, možno použiť na posúdenie tekutosti prášku [3].
2. Chemická analýza
Identifikácia aktívnych zložiek
Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je jednou z najčastejšie používaných techník na identifikáciu a kvantifikáciu aktívnych zložiek v sterilnom lyofilizovanom prášku. HPLC oddeľuje zložky vzorky na základe ich interakcie so stacionárnou fázou a mobilnou fázou. Môže poskytnúť separáciu s vysokým rozlíšením a presnú kvantifikáciu aktívnych zložiek. Hmotnostná spektrometria (MS) môže byť spojená s HPLC (HPLC - MS), aby sa získali podrobnejšie štruktúrne informácie o analytoch, čo je obzvlášť užitočné na identifikáciu neznámych nečistôt [4].
Analýza čistoty a nečistôt
Okrem identifikácie aktívnych zložiek je dôležité analyzovať čistotu sterilného lyofilizovaného prášku a odhaliť prípadné nečistoty. Nečistoty možno klasifikovať ako organické nečistoty (ako sú produkty degradácie, nečistoty súvisiace s procesom), anorganické nečistoty (ako sú ťažké kovy) a zvyškové rozpúšťadlá. Na detekciu a kvantifikáciu týchto nečistôt sa používajú techniky ako HPLC, plynová chromatografia (GC) a atómová absorpčná spektroskopia (AAS). Napríklad GC sa bežne používa na analýzu zvyškových rozpúšťadiel, zatiaľ čo AAS sa používa na stanovenie ťažkých kovov [5].
Obsah vlhkosti
Obsah vlhkosti môže výrazne ovplyvniť stabilitu a trvanlivosť sterilného lyofilizovaného prášku. Karl Fischer titrácia je najpoužívanejšia metóda na meranie obsahu vlhkosti v lyofilizovaných produktoch. Je založená na reakcii medzi jódom, oxidom siričitým a vodou v prítomnosti zásady. Môžu sa použiť aj iné metódy, ako je strata sušením (LOD), ale Karl Fischer titrácia je špecifickejšia a presnejšia na meranie nízkych hladín vlhkosti [6].
3. Biologická analýza
Mikrobiologické testovanie
Sterilita je kritickým atribútom kvality sterilného lyofilizovaného prášku. Vykonáva sa mikrobiologické testovanie, aby sa zabezpečilo, že výrobok neobsahuje životaschopné mikroorganizmy. Najbežnejšou metódou testovania sterility je metóda membránovej filtrácie, kde sa vzorka filtruje cez membránu s dostatočne malou veľkosťou pórov na zadržanie mikroorganizmov. Membrána sa potom inkubuje vo vhodnom kultivačnom médiu na detekciu rastu akýchkoľvek mikroorganizmov. V určitých prípadoch možno použiť aj iné testy, ako je priama metóda očkovania [7].
Testovanie endotoxínov
Endotoxíny sú lipopolysacharidy nachádzajúce sa vo vonkajšej membráne gramnegatívnych baktérií. U ľudí môžu spôsobiť pyrogénne reakcie. Test Limulus amebocyte lysate (LAL) je najpoužívanejšou metódou na detekciu endotoxínov v sterilnom lyofilizovanom prášku. Je založená na reakcii gél – zrazenina, ku ktorej dochádza, keď endotoxíny reagujú s lyzátom z krviniek podkovičky. K dispozícii sú aj metódy založené na rekombinantnom faktore C (rFC), ktoré sú špecifickejšie a majú menej problémov s interferenciou v porovnaní s testom LAL [8].
Testy účinnosti a bioaktivity
Je potrebné určiť účinnosť a biologickú aktivitu sterilného lyofilizovaného prášku obsahujúceho biologicky aktívne zložky. Na tento účel sa bežne používajú bunkové testy, zvieracie modely a in vitro väzbové testy. Napríklad, ak lyofilizovaný prášok obsahuje rastový faktor, na meranie jeho bioaktivity možno použiť test bunkovej proliferácie. Tieto testy môžu poskytnúť informácie o účinnosti produktu v biologických systémoch [9].
4. Testovanie stability
Zrýchlené a dlhodobé štúdie stability
Testovanie stability je nevyhnutné na určenie doby použiteľnosti a podmienok skladovania sterilného lyofilizovaného prášku. Zrýchlené štúdie stability sa vykonávajú pri zvýšených teplotách, vlhkosti a svetelných podmienkach, aby sa simulovalo dlhodobé skladovanie. Vzorky sa v pravidelných intervaloch analyzujú na fyzikálne, chemické a biologické zmeny. Štúdie dlhodobej stability sa uskutočňujú za podmienok skladovania v reálnom čase, aby sa potvrdili výsledky zrýchlených štúdií. Údaje získané z týchto štúdií sa používajú na stanovenie dátumu exspirácie a odporúčaní na uchovávanie produktu [10].
Dôležitosť presnej analýzy
Presná analýza sterilného lyofilizovaného prášku je rozhodujúca z niekoľkých dôvodov. Po prvé, zaisťuje bezpečnosť koncových používateľov. Detekciou a kontrolou nečistôt, endotoxínov a mikroorganizmov môžeme predchádzať potenciálnym nežiaducim reakciám. Po druhé, zaručuje účinnosť produktu. Meranie potencie a biologickej aktivity účinných látok pomáha zaistiť, že produkt prináša zamýšľaný terapeutický účinok. Napokon to vyžadujú regulačné orgány. Súlad s regulačnými normami je nevyhnutný pre marketing a distribúciu sterilného lyofilizovaného prášku.
Ak máte záujem o našeSterilný lyofilizovaný prášok,Lyofilizovaný prášok vo fľaštičkealeboSkin Smooth Lyophilized Powder Injectiona chcete diskutovať o obstarávaní, neváhajte nás kontaktovať. Zaviazali sme sa poskytovať vysoko kvalitné produkty a vynikajúce služby.
Referencie
[1] Müller, RH, & Petersen, R. (2008). Nanočastice: Príprava a charakterizácia. In Nanomateriály pre vedy o živej prírode (s. 1 - 32). Wiley - VCH Verlag GmbH & Co. KGaA.
[2] Allen, T. (1997). Meranie veľkosti častíc. Chapman & Hall.
[3] Carr, RL (1965). Hodnotenie tokových vlastností tuhých látok. Chemické inžinierstvo, 72(12), 163 - 168.
[4] Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Glajch, JL (2010). Praktický vývoj metódy HPLC. Wiley - Interscience.
[5] United States Pharmacopeia (USP). (2020). Všeobecné kapitoly: <467> Reziduálne rozpúšťadlá; <231> Ťažké kovy.
[6] Karl Fischer, J. (1935). Stanovenie vody v organických látkach titráciou roztokom jódu v oxide siričitom - pyridíne. Applied Chemistry, 48(34), 394-396.
[7] Európsky liekopis (EP). (2020). 2.6.1. Sterilita.
[8] United States Pharmacopeia (USP). (2020). <85> Test bakteriálnych endotoxínov.
[9] van der Wielen, LAM, & Tramper, J. (2007). Princípy bioprocesného inžinierstva. Cambridge University Press.
[10] Medzinárodná konferencia o harmonizácii (ICH). (2003). Q1A(R2) Testovanie stability nových liečivých látok a produktov.
